常bob.com见组织细胞的培养方法！
bob.com体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背 景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施 亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下：
上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜， 因此培养在有胶原的底物上可能利于生长， 另外人或小鼠表皮细胞培养在以 3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低 PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。以表皮细胞为例， 用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞， 其法如下：
1、 取材：外科植皮或手术残余皮肤小块， 早产流产儿皮肤更好， 取角化层薄者， 切成 0.5－1 平方厘米小块。
4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与线、取出表皮，剪成更小的块后，置 0.25%胰酶中，37℃，30—60 分钟。
8、直接加入培养基（Eagle 加 20%小牛血清）制成细胞悬液，接种入培养瓶，CO2 温箱培养。
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子（TAF）等有很大价值。研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便，其法如下：
2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧， 以防液体返流。
3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为 0.1%的粗制胶原酶，充满血管，消化 3—10 分钟；注入口用线绳扎bob.com，以防液体返流。
4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温 PBS 轻轻反复冲洗后，一 并注入离心管中（此步骤可重复） 。
5、离心去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温 箱培养。两至三天可见细胞长成单层。
神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象， 但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用 ROUS病毒和SV4等诱发转化。
所有培养器皿均需清水冲洗2-3d，达两次ddH2O，每遍洗刷3-4次，加塞包装，置于烤箱中干燥消毒，于培养前1天进行。
常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不过也有认为与组织相关。如大白鼠胚胎以19d为宜，小鼠以18d为宜，大鼠纹状体以10d为宜；若纹状体与黑质联合培养的大鼠胚，则黑质以13d，纹状体18-21d为宜；小脑以20-21d小鼠胚胎，所获蒲氏细胞成活率高，颗粒细胞正在分化；脊髓与DRG联合培养，常用4-7d鸡胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神经成活率高。
脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓则固定于琼脂板上，用小刀将其要成背腹两侧，分别培养。
神经组织用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接种液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用细口吸管吹打细胞悬液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上层细胞悬液，计数，预置细胞密度，接种于培养皿（1×106），做电生理应为5×105或更低。
培养3-5d后，也有人认为培养7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神经胶质细胞的生长
2、无菌取大腿肌组织，切成 0.3 一 0.5cm2 小块后bob.com，用不含钙镁离子的 Hanks 液配的 0.25%胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过。
5、培养基内含 10%胎牛血清，可加 1%的胎汁以促进分化。接种在胶原或胶原的底物上能促进细胞分化，明胶配置：用 Hanks 液配成 0.01% 明胶。该细胞接种率约 50%，细胞生长开始呈纺锤形，培养 50－52 小时后出现融合形 成肌细胞状多核纤维。数日后融合停止，此时可观察到横纹，一般在融合后二、三天内能见到收缩现象。
心肌细胞是最早的培养材料，Carrel 曾长期培养过心肌组织，至今心肌仍不失为好的培养物，最常用的是鸡胚心肌。心肌比较容易培养和生长，可用悬滴培养、组织块培养和消化培养法，均可获良 好的效果。取心室肌培养较好，原代培养的鸡胚心肌呈纺锤形，培养成功时，一 周后可见节律性收缩现象。
巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的 重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细 胞群，在条件适宜下可生活 2－3 周，多用做原代培养，难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P331bob.com、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难 以建株。
SD 大鼠颈椎脱臼法处死，75%乙醇浸泡 1～2 分钟，2 次，置超净台内，打开腹腔取出肾脏剪碎，置含 Hanks 液的无菌培养皿洗涤，置 80 目不锈钢筛网上。
用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网，滤过组织 Hanks 液混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网，滤过，去小组织块，滤过物吸至200目不锈钢筛网，轻轻滤过， Hanks液洗涤 次， 收集网上肾小球， 镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2%胰酶、0.1%胶原酶，37℃消化20 分钟，加血清终止胰酶反应，离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至24孔培养板或25ml培养瓶，使肾小球大于60个/cm2，加培养基5～10ml（培养基组成：F12—3T3 上清 1：1；5% 马血清；2.5%胎牛血清；胰岛素 5μg/ml；25ng/ml 氢化可的松；5μg/ml转铁蛋白；25ng/ml 前列腺素 E1；甲状腺素 0.02ng/ml；D-缬氨酸 150ng/ml）肾小球培养 8～10 天，去除肾小球未生长组分，细胞继续培养 24 小时，形态学观察：细胞生长成单层多角型细胞，直径约 100μmbob.com。
无菌条件下取出小鼠移植瘤组织，剪成1mm3 小块，用0.5%胶原酶室温消化30分钟到1小时，再加等体积0.2%胰酶消化5～8分钟，在消化过程中用吸管吹打 组织块或用自制装置（分别作为加样和收集器的两个注射器中间加一小滤器连接而成，滤器中间垫两层丝质材料以隔断组织块与单细胞）来回推动注射器吹打组 织以分离单细胞bob.com，终止酶消化方法同上。常规方法接种培养收获细胞。